Leporello står på vakt utanför guvernörens palats, där hans husbonde Don Giovanni är på äventyr. Denna gång försöker Don Giovanni under förklädnad förföra guvernörens sköna dotter Donna Anna. Till undsättning kommer Annas far, guvernören, och det blir en kort duell. Don Giovanni dödar guvernören, men lyckas fly undan utan att bli igenkänd. Donna Anna kräver sin trolovade Don Ottavio på vedergällning över faderns död.
Don Giovanni träffar Donna Elvira, som han en gång i tiden svurit kärlek (Elvira: Ah! chi mi dice mai quel barbaro dov’è). På Giovannis uppmaning berättar Leporello om husbondens otaliga erövringar för Elvira i sin katalogaria (Madamina, il catalogo è questo). Elvira har således varit bara en av Don Giovannis 2065 erövringar.
Zerlina och Masetto firar bröllop. Don Giovannis intresse för bruden vaknar och han inbjuder hennes brudsällskap med sig hem. Under den tiden ser Leporello till att brudgummen hålls borta från händelsernas centrum. Don Giovanni förför Zerlina (duetten Là ci darem la mano), men Donna Elvira blandar sig i saken.
Då Donna Anna och Don Ottavio kommer till platsen, känner Anna igen sin fars mördare och kräver hämnd (Or sai chi l’onore).
Under festen sjunger Don Giovanni en dryckesvisa (Fin ch’han dal vino) och försöker under dansen förföra Zerlina på nytt. Donna Anna avslöjar emellertid honom som mördare. Don Giovanni tar till flykten. Leporello är berusad mitt i festyran.
Leporello gör uppror och vill inte längre betjäna som omoralisk husbonde. Don Giovanni mutar emellertid Leoporello att fortsätta. Nu vaknar Don Giovannis intresse för Elviras tjänarinna och för att förföra henne byter han kläder med Leporello. Leporello far iväg med Donna Elvira och Don Giovanni sjunger en serenad för tjänarinnan (Deh! vieni alla finestra).
Masetto vill nu utkräva hämnd och Leporello, som han uppfattar som Don Giovanni, tar till flykten. Leporello blir tvungen att avslöja för Masetto och dennes vänner vem han egentligen är och lyckas ta till flykten. Don Ottavio berättar om sin kärlek till Anna (Il mio tesoro intanto).
Don Giovanni möter guvernören som han har dödat och nu inbjuder han denne på middag. Guvernören svarar jakande.
Då måltiden börjar, ber Elvira förgäves Don Giovanni att ändra sin livsföring. Samtidigt kommer den tredje gästen: komturen har hörsammat inbjudan. Komturen kräver att Don Giovanni skall stå till svars för sina gärningar, men Don Giovanni ångrar sig inte.
